Определение количества бактерий группы кишечной палочки

При бактериологическом исследовании воды прежде всего ставится цель установить, заражена ли вода болезнетворными бактериями, возбудителями тифа, холеры, дизентерии. Поскольку определить наличие этих бактерий очень трудно, то обычно бактериологический анализ воды сводится к выявлению бактерий группы кишечной палочки, которые для человека не опасны, но присутствие их свидетельствует о загрязнении воды фекалиями и вызывает подозрение о наличии в воде болезнетворных микроорганизмов.

Сущность метода

Обнаружение бактерий группы кишечной палочки основано на их способности, в отличие от других бактерий, размножаясь, сбраживать сахар. Если питательная среда одержит молочный сахар, то он сбраживается до молочной  кислоты, которая разрушает соединение фуксина сульфитом. В местах роста колоний бактерий Coli образуются окрашенные фуксином красные блестящие бугорки, по числу которых судят о количестве бактерий Coli.

Содержание в воде бактерий группы кишечной палочки характеризуют коли-титром, который численно равен объему воды в миллилитрах, содержащему одну кишечную палочку. Титр кишечной палочки является решающим показателем санитарного состояния воды. Если одна кишечная палочка содержится в 100 мл воды, то такая вода считается чистой, если в 10 мл - достаточно чистой, в 1 мл – сомнительно чистой. При наличии одной кишечной палочки в 0,1 мл воду считают сильно загрязненной и непригодной для питья.

Для обеззараженной и осветленной воды, используемой для хозяйственно-питьевых целей, коли-титр в отдельном определении должен быть не ниже 300–330 мл. Загрязнение воды кишечными палочками характеризуют также коли-индексом - количеством кишечных палочек в 1 л воды. Согласно ГОСТ 2874-82, коли-индекс питьевой воды не должен превышать 3.

Для определения количества бактерий группы кишечной палочки существует два метода: бродильный и мембранных фильтров. Сущность последнего метода состоит в концентрировании бактерий из определенного объема исследуемой воды на мембранном фильтре и выращивании их при температуре 37 ± 0,5 °С в среде Эндо. При этой температуре создаются оптимальные условия для выращивания бактерий.

Материалы и оборудование

– мембранные фильтры;

–        водоструйный насос;

–        проба исследуемой воды объемом не менее 500мл;

–        среда  Эндо;

–        стерильные чашки Петри;

–        стерильные пинцеты;

–        спиртовка;

–         пробирки с дистиллированной водой;

–        микробиологическая петля;

–        микроскоп;

–        красители для окраски по Граму;

–        предметное и покровное стекло.

Проведение анализа

В фильтровальный аппарат* помещают стерильный мембранный ультрафильтр, взяв его обожженным пинцетом из сосуда, в котором проводилась стерилизация. Под мембранный ультрафильтр подкладывают простерилизованный кружок фильтровальной бумаги, смоченный стерильной водой.

Для фильтрования берут 300...500 мл воды. Если вода сточная, то ее предварительно разбавляют стерильной водой в 100...1000 раз.

После окончания фильтрования мембранный ультрафильтр снимают обожженным пинцетом с прибора и рас полагают на поверхности фуксинсульфитного агара (среда Эндо), помещенного в чашку Петри. Затем чашку помещают вверх дном в термостат при температуре 37 °С на 24 ч. Через 24 ч подсчитывают колонии бактерий, окрашенные в красный цвет с металлическим блеском.

Затем рассчитывают коли-титр, мл

Коли-титр =  ,                                                            (42)

или коли-индекс:

Коли-индекс = .                                                  (43)

Здесь n – количество бактерий группы кишечной палочки (n), выращенных из исследуемого объема воды (V). На основании результатов определения общего микробного числа и коли-индекса делают вывод о бактериологической безопасности воды.